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农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选

农杆菌 转化 丝状真菌

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农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选

刘朋娟!王政逸"!王秋华!李德葆

!浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所"浙江杭州!$%"##$%#"通讯联系人"&’()*+,-/)034563470!,.12

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50*7*95=579*B5(39)091.6摘!要$在构建了两个含有潮霉素L磷酸转移酶基因双元载体的基础上"成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化"转

P化效率达每"O"并得到了N证明插入到稻瘟病#个分生孢子#!##个转化子"###多个转化子&通过继代培养和@VW检测"

菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传&Q大约有$’>39-5;0杂交分析表明"!转化子的:’AGF插入是单拷贝的&用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性"发现一个致病缺陷突变体$F"’N"$&该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片"说明F"’N"$突变体在寄主组织中扩展进程被阻断&进一步的表型分析发现F"’N"$突变体的产孢量显著下降"仅为野生菌株的RS"在疏水表面不能形成附着胞"部分分生孢子萌发也略有延迟&Q>39-5;0杂交显示F基因组中插入是单拷贝的&上述结果表明"突变体表型的改变可能是由于插入而使某一"’N"$:’AGFF"’N"$:’AGF具有重要生物学功能的基因失活所致&

关键词$稻瘟病菌#根癌农杆菌介导转化#插入突变#致病缺陷突变体

中图分类号$J%!!#QN!X4"""4NY"

文献标识码$F

文章编号$!%"##"’R$"P$##P#!’#$!"’#R

无性世代0&.&$#(2)"#*/)&%(!!稻瘟病菌!"1

!)是一种异宗配合的子囊菌"H#*’+4&#*&$#>&)%55在多种草本植物上引起叶斑病害"其中最著名的是侵染水稻造成稻瘟病"全世界每年由稻瘟病造成的

)"水稻产量损失在"&由于稻瘟病的重#S"!#S(

)))NXP的方法获得的"如H***I=B(HI=@@(HJK@()R等一些在致病过程中具有重要生物学功能HLE@(

的基因"这说明A分离功能基GF插入突变是标记*

因的有效途径之一&丝状真菌AGF转化通常是通过制备原生质体"在V’)V+@&H的介导下实现的"$如常规质粒AGF转化!限制酶介导AGF整合转化!%;5<9;*79*>050,(5’(56*)956*095;)9*>0"W&8?.1

)Z等(&新近的研究表明"外源AGF不仅可以通过农杆菌!介导转化!#$%&’()#*+,(+,)&’*)./%"-

要性和对稻瘟病菌传统遗传*分子遗传及致病过程细胞学的可操作性"它已成为研究植物病原真菌与

)$’!寄主互作较为理想的模式系统之一(&分离和鉴

定稻瘟病菌的致病相关基因是了解稻瘟病菌致病机理的重要方面"它不仅利于有针对性地设计药物防治稻瘟病"而且对其他植物病原真菌的研究也具有重要意义&迄今"在稻瘟病菌中已鉴定了约N#个致病基因"其中部分基因是通过外源AGF插入突变

收稿日期$$##X’#X’"##修改稿收到日期$$##X’"$’#"&

基金项目$国家自然科学基金资助项目!!#$R#ZP""%&!#XR##XN

第一作者简介$刘朋娟!"女"硕士研究生&"%Z#[%

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