植酸酶酶活测定方法的研究

杨平平

王

燕

史宝军

陶文沂

植酸及其盐类广泛存在于植物组织和相应的粮

食产品中，占其总量的!"#$"，其中磷含量占植物总磷的%&"#’&"，是磷和肌醇的主要储存形式。而植酸形式的磷不但不能被单胃动物所消化利用，它还抑制多种营养成分的吸收和利用。植酸酶是催化植酸水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称，由于植酸酶的这一特点，它已在饲料和食品工业中广泛地得到应用。

植酸酶的产生主要是依靠微生物发酵获得，近年来有关微生物发酵生产植酸酶为目的的研究、开发报道很多，微生物发酵法生产植酸酶取得了很大进展。植酸酶酶活性的测定主要是检测分解产物无机磷的生成量。目前植酸酶酶活测定方法中存在着酶活单位混乱、测定结果误差大等一些问题。经笔者在植酸酶酶活测定的研究过程中发现造成植酸酶研究、开发诸多混乱的原因多与植酸酶的测定误差有一定关系。而造成这种植酸酶的测定误差现象的原因主要有两个方面：一是发酵原料中含有一部分无机磷（例如麸皮等）；二是菌体生长过程中生物合成的植酸酶不断降解底物中的植酸盐，释放无机磷，而该发酵过程持续时间较长，造成培养基中无机磷的大量积累。但对于植酸酶酶活测定而言，反应一般在较短的时间内完

（植酸钠）成，植酸酶分解底物所释放的无机磷比粗酶

（发酵液）（发酵液）液中的无机磷低的多，粗酶液中的无机磷严重干扰了植酸酶活力测定的准确性。以往报道的植酸酶活力测定的研究较多，但主要是围绕着测定过程中无机磷的敏感性方面做的工作，对粗酶液（发酵液）中无机磷对酶活测定结果的影响及如何消除酶液（发酵液）中无机磷对酶活测定结果的影响尚未见报道。本研究通过该方面研究试图建立更加完善的植酸酶酶活测定方法。

为本实验室保藏的产植酸酶菌种。!(!()培养基

!(!()(!摇瓶培养基*"+葡萄糖$(&,-./-0$&(),1230/ 4.)0&(&5，678&(&5，1930/ 4.)0

植酸钙&(&&&5,:;30/ 4.)0&(&&&5,6).<0/&(&%，

&(5，=.值自然。

!(!()()微板培养基*"+葡萄糖$(&，-./-0$&()，1230/ 4.)0&(&5,678&(&5，1930/ 4.)0&(&&&5，:;30/ 4.)0&(&&&5,植酸钠&(%，=.值自然。

!(!($主要试剂

（3>2?@公司产品）植酸钠，植酸钙为化学纯，其余

试剂均为分析纯。!()方法

!()(!钼蓝法植酸酶酶活测定方法

将&(!?8酶液或&(!?8灭活酶液（作对照）加入到&(’?8含有!??A8B8植酸钠的&()5?A8B8=.5(5的乙酸—乙酸钠缓冲液的比色管中，在$4C下恒温

（D7E）水浴反应!&?>9，再加入!?8!&"三氯乙酸，

（E-3），继续保)(5?8钼酸铵—硫酸，&(5?8定磷试剂