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MTT实验设计

MTT实验设计的一个例子

培养到对数期的HeLa细胞,悬浮,血细胞计数板测浓度,每孔加约104个细胞,补培养基至150μL。剩余的细胞传代。

MTT实验设计

孵育24h,观察贴壁情况,弃掉培养基,加入不同浓度的卡铂溶液(卡铂用DMEM溶解),浓度按照表格所示。

孵育24h,弃掉加药培养基,加入100μL DMEM和10μL MTT。 孵育4h,弃掉培养基,加入100μL裂解液,避光过夜。 用酶标仪测各孔吸光度,计算IC50。

得到IC50浓度后,在此浓度前后再各取一个浓度(得到IC50浓度后再确定),按照浓度大小分别为浓度1、2、3 不加药物的称为浓度0

沉默CrpF46基因的HeLa细胞为“抑”,正常HeLa细胞为“正”,CrpF46基因过表达的HeLa细胞为“超”。

三种细胞,三种药物浓度,和不加药物

MTT实验设计

流式细胞术

沉默细胞 正常细胞 过表达细胞 沉默细胞 正常细胞 过表达细胞 不加药 不加药 不加药 加药 加药 加药

观察细胞贴壁生长状况,吸去培养液,向其中一瓶中加入3ml药物,向另一瓶中加入3ml DMEM。将细胞置于37℃,5% CO2培养箱内孵育24h。

24h后,观察细胞生长状况。收集细胞,离心。弃上清,每管加入5ml预冷PBS重悬细胞,离心,余下一部分液体,轻敲管底,重悬细胞。向10ml管中加入10ml冰冷的70%酒精,用针

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