应用多重套式PCR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体

根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列pMGA和v1hA各设计两对引物,建立鉴别诊断两种支原体的多重套式PCR方法,对其进行温度条件、Ⅱ步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法在两步PCR后能特异性地扩增出MG(408bp)和MS(688bp)两个目的片段。应用于临床样品检测,与支原体分离、SPA检测比较结果PCR灵敏度高于病原分离。

3 试验研究 4

广东畜牧兽医科技

21年( 3卷) 4 00第 5第期

应用多重套式 P CR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体 黎敏，管凤霞，刘玲，黄鹏华，温纳相 (东温氏食品集团有限公司，广东云浮 5 7 0 广 2 4 0) 摘要：根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列 pG和 v h MA lh各设计两对引物，建立鉴别诊断两种支原体的多重套式 P R方法，对其进行温度条件、 I步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法 C I 在两步 P R C后能特异性地扩增出 M (0 p G 4 8b)和 M (8 p S 6 8b )两个目的片段。应用于临床样品检测，与支原体分离、SA检测比较结果 P R灵敏度高于病原分离。 P C

关键词：鸡毒支原体；鸡滑液支原体；多重套式 P R C 中图分类号：￥ 5 . 9 8 2 6文献标识码：A 文章编号：1 0 - 5 7 2 l ) 4 0 3— 3 0 5 8 6 (0 O 0— 0 4 0

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鸡毒支原体 (y o l s a g l i e t cm M c p a m a l sp i u,

泛应用啪。本试验针对血凝素基因 M lA基因和 Svh M M A因片段建立多重套式 P R以期为鉴别 GpG基 C,

M) G和鸡滑液囊支原体 (y o l s a s n v a,S M c p a m y o i eM ) 通常被认为是致病性鸡支原体中最主要的两种。 G M

两种鸡支原体提供更为准确、快捷的诊断方法。

可引起鸡的呼吸道疾病和产蛋率下降，是支原体中

1材料与方法 11材料 .

对养禽业造成最严重经济损失者；S可引起鸡、 M火 鸡和其它禽类的关节炎，并与呼吸道疾病有所关联 [ u ,

111种毒 ..

MG1 S X卜T株 (号： 0 4 7、 G 批 200) M—

临床上常出现两者同时混合感染的情况。断两诊

B 4 7株 (号： 0 5 2 1、法氏囊病毒 1D G4批 200 0) B

者通常采用血清学方法，但无论是 S A H P、 I还是

B 68 C/ 5株 (号： 0 5 0 9购自中国兽药监察批 20 11)所，喉气管炎病毒 (L V、鸡 I T )鸡传染性支气管炎病毒 (B ) I V、鸡传染性贫血病毒 C V为广东温氏集 A

E IA都存在假阳性反应 E仍需进行病原

的分离 LS 2],鉴定进行确认，费时费力，不适应快速、准确的确诊

要求。针对此情况分子生物学方法被广泛应用，早 期建立 P R诊断方法主要是针对 1 Sr N C 6 R A基因设计，由于相似性高达 7%扩增后还需限制酶切但 8,分析翻 D A探针[或 N 4],验证因此近几年针对 M g 2 G m c 基因[是 M l A基因[立的 P R方法呈现新 5 3或 Sv h 6]建 C

团研究院禽病研究中心自行分离鉴定毒株。 112实验仪器及试剂 M .. S阳性血清 (号：批

的发展趋向，同时套式 P R较普通 P R灵敏度更 C C高、异性更好的优势使其在支原体研究中也被广特 收稿日期： 0 O 0— 1 2 1 - 3 3

200 )M 07 1、G阳性血清 (批号：0 8 1购自中国兽 2 00)药监察所：禽流感病毒 A 5(号：0 8 0 8、 IH批 2 0 12 )新城疫病毒 N (号： 0 8 1 8血凝抗原购自广 D批 2 0 1 1)东大华农动物保健品股份有限公司；N DA提取试 剂盒购自北京天根生化科技有限公司； x T q酶 E—a

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