成人胰岛分离纯化的实验研究

第25卷第3期2004年6月西安交通大学学报（医学版）JournalofXi'anJiaotongUniversity（MedicalSciences）7ol8259o83

Jun82004

成人胰岛分离纯化的实验研究

李 平1，王惠芳1，徐 利1，冯新顺3，于琳华2，何 岚1，朱本章1

（西安交通大学：1.第一医院内分泌科；2.医学院病理解剖学教研室；3.第一医院肾病中心，陕西西安 710061）摘要：目的 研究成人胰岛分离纯化方法。方法 在传统的胰岛分离纯化方法的基础上，就供体选择、消化条件及方法、胰岛保护等方面作了一些改进，并在消化液和Ficoll分离液中加入大豆胰酶抑制剂（STI）、牛血清白蛋白（BSA）。结果 分离纯化后胰岛产量由原来的（991±144）个胰岛 g-1组织提高至（2043±249）个胰岛 g-1组织（P<0.01）；纯度由40%提高到60%。结论 改进后的方法简单易行、经济实用，成功解决了传统方法中凝胶样物形成的BSA在成人胰岛分离纯化中同样具有保护作用；所获胰岛产量、纯度提高，并具良好的生物学活性。难题；证实STI、关键词：成人；胰岛；分离；纯化中图分类号：Q455

文献标识码：A

文章编号：1671-8259（2004）03-0294-02

Studiesonisolationandpurificationofisletsinadulthumans

LiPing，WangHuifang，XuLi，FengXinshun，YuLinhua，HeLan，ZhuBenzhang（DepartmentofEndocrinology，FirstHospitalofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061，China）ABSTRACT：Objective :ostudyt;e<et;odforisolationand=urificationofisletsinadult;u<ans8Methods

:;etraditional<et;od>as<odifiedinas=ectsoft;eselectionofdonor，t;econditionandtec;ni?ueforo=ti<u<digestion，andt;e=reservationofisolatedislets8Soy@eantry=sinin;i@itor（S:A）and@ovineseru<al@u<in（BSC）>ereaddedintot;edigestiveandDicollse=arationsolutions8ResuIts :;eyieldofislets>asincreasedfro<（991±144）isletsto（2043±249）islets=ergra<oftissue8:;e=urityofisletsi<=rovedfro<40Eto60E8ConcIusion :;e<odified<et;odisfeasi@le，convenientandecono<ical8Atresolvedt;edevelo=<entofgelliFe<aterialintraditional<et;od，=rovingt;atS:AandBSCcan=rotectt;efunctionand<or=;ologicintegrityofisletsinadult;u<ans，>it;;ig;erisletsyieldand=urity，andgood@iologicalactivity8

KEYWORDS：adult;u<ans；islets；isolation；=urification 获得足量高纯度、高活性的胰岛，是临床胰岛移植及体外基础研究所必须的。目前国外普遍使用的自动分离纯化技术在国内尚未普及，而传统的胰管内灌注胶原酶消化法，存在着操作繁琐及凝胶样物形成等缺点，胰岛产量、纯度不稳定，不能满足临床移植及

［1］

基础研究的需要。本研究以开发成人胰岛分离纯

基本正常。无菌条件下取出胰腺，保存在4℃Euro-Collins液中，整个过程热缺血时间<10min。1.2 试剂 胶原酶V型为Sigma产品，大豆胰酶抑制剂（STI）购自上海丽珠东风生物技术有限公司，牛血清白蛋白（BSA）购自华美生物工程公司，Ficoll400为Phamacia产品，其他常规试剂均为进口或国产分析纯。

1.3 消化液、分离液的配制 消化液为用Hanks液配含4.6g L-1甘油，制的质量浓度为2g L-1的胶原酶，

含及不含STI（2g L-1）、BSA（20g L-1）。分离液的配制：先用Hanks将Ficoll配制成37.5%、30.0%、16.5%（体积分数）的储存液，高压灭菌，按2:1加入预（6g L-1）中。将储先用Hanks配制并过滤灭菌的STI

存液稀释成25%、20%、11%（体积分数）的使用液。1.4 胰岛分离及纯化 胰腺取出后，去除周围脂肪组织及血管，称重。胰岛分离前冷缺血时间为4～8h。寻找主胰管，插入导管，反复注入38℃消化液，直至胰尾部明显膨胀，有透亮感。剪取该部分胰腺组

化方法为目的，对传统胰岛分离纯化方法中存在的问题进行改进，并探讨预防性添加大豆胰酶抑制剂（soybeantrypsininhibitor，STI）、牛血清白蛋白（bo-vineserumalbumin，BSA）对成人胰岛分离纯化效果的影响。1 材料与方法

1.1 胰腺来源 胰腺取自成人尸体供者，供体年龄20～40岁，无糖尿病及相关病史，术前各项常规检查

收稿日期：2003-04-13 修回日期：2003-08-22作者简介：李平（1978-），女（汉族），硕士，住院医师.现工作单位：南

京鼓楼医院内分泌科.

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