SD大鼠脑皮层星形胶质细胞的原代培养及纯化方法改良

陕西医学杂志２００９年９月第３８卷第９期 特约稿件

１１０７

ＳＤ大鼠脑皮层星形胶质细胞的原代培养及纯化方法改良△

西安交通大学医学院第二附属医院儿科（西安７１０００４）

摘要

王雪莹

黄绍平。

陈小聪一姜永生

目的：探讨大鼠大脑皮层星形胶质细胞的培养方法，以获得纯度高的细胞进一步

对其进行体外实验研究。方法：在Ｍｃ—Ｃａｒｔｈｙ方法基础上改用出生后ｌｄ的ＳＤ大鼠的大脑皮层，结合机械分离和胰酶消化后制备单细胞悬液接种，差速贴壁１ｈ，培养１４ｄ以后上摇床以去除混杂细胞，细胞融合后传代，每次传代前都经历胰酶冲洗和差速贴壁，传３代后利用ＧＦＡＰ—ＦＩＴＣ免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果：经过原代传代及纯化，大脑皮层星形胶质细胞体外培养成功，并有较高的纯度。ＧＦＡＰ—ＦＩＴＣ免疫荧光染色阳性。结论：经过合理取材、改良纯化方法后，可以更为简便得到纯度很高的星形胶质细胞。

主题词

星形细胞细胞培养

大脑皮层

体外发生

模型，动物

大鼠

Ｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ

ｏｎ

ｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆａｓｔｒｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｅｘｏｆＳＤｒａｔｓ

ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉ’ａｎ

ＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｘｉ’ｆｌｕ７１０００４）ＷａｎｇＸｕｅｙｉｎｇＨｕａｎｇＳｈａｏｐｉｎｇ

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ｍｅｔｈｏｄｏｆ

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ｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｅｘｗａｓ

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ｉｎ

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ｏｒｂｉｔａｌｓｈａｋｅｒａｆｔｅｒ１４ｄａｙ’ｓｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ，ｐａｓｓａｇｅｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｃｅｌｌｆｕｓｉｏｎ．Ｔｒｙｐｓｉｎｗａｓｈｉｎｇａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｖｅｌｏｃｉｔｙａｄｈｅｒｅｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗｅｒｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ

ｂｙ

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ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ—ＧＦＡＰａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒｐｒｉｍａｒｙｃｅｌｌ

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ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｗｅ

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ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．

ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｗｅｓｉｍｐｌｙ

ＫＥＹ

ＷｏＲＤＳ

Ａｓｔｒｏｃｙｔｅ

ＣｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅＣｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｅｘ

Ｅｃｔｏｇｅｎｅｓｉｓ

Ｍｏｄｅｌ，ａｎｉｍａｌＲａｔ

神经系统疾病研究中，星形胶质细胞（Ａｓｔｒｏｃｙｔｅ，Ａｓ）的变化和作用越来越受关注。对星形胶质细胞功能的认识主要是通过对离体培养星形胶质细胞的观察获得的，因此进行星形胶质细胞的原代和传代培养是接下来许多研究的基础。目前国内外普遍采用的传统方法操作相对复杂，对实验室条件要求高。为了进一步提高星形胶质细胞原代和传代培养的成功率和简化实验操作方法，本组进行了研究和部分技术改良，获得了较好的结果，现分析报告如下。

△国家自然科学基金资助（Ｎｏ

＊通讯作者

＊＊西安市儿童医院

１

材料与方法

动物与仪器

新生２ｄＳＤ大鼠，雌雄不限，由

西安交通大学医学院动物中心提供；ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基，胎牛血清由ＧＩＢＣＯ公司提供；兔抗大鼠胶质纤维酸性蛋白（Ｒａｂｂｉｔ

ａｎｔｉ—ｒａｔ

ＧＦＡＰ）、异硫氰酸荧光素标

ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ

ＩｇＧ

ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ

记羊抗兔二抗（Ｇｏａｔ

ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｔｉｂｏｄｙ）由博奥森公司生产；

胰蛋白酶由ＳＩＧＭＡ公司生产；Ｈａｎｋｓ液和ＰＢＳ液均用市售分析纯试剂配制，由西安交通大学医学院遗传实验室提供。细胞培养瓶由西安交通大学医学院遗传实验室提供。超净工作台（Ｔａｉｓｉｔｅ），倒置显微镜（Ｔｅｎｓｉｏｎ），Ｃ０２培养孵箱（Ｔｈｅｒｍｏ），恒温震荡培养箱（ＳＨＺ一８２）、尼康荧光显微镜等。

３０６７２２６３）

万方数据

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