分子标记技术在烟草遗传育种中的应用研究进展

分子标记技术在烟草遗传育种中的应用研究进展

况下难以找到与目标基因相连锁的形态标记，所以传统的育种手段对目标性状的改良常常耗时、费力、效率不高。分子标记技术的发展为解决这一问题开创了新的途径。

1．烟草遗传育种研究中常用分子标记的类型及特点

烟草遗传育种研究中应用的分子标记技术主要包括RFLP、RAPD、AFLP、SRAP和SSR，下面对这几种分子标记技术的原理和特点作一简单介绍。

1.1 RFLP标记

RFLP是基于Southern杂交的分子标记方法[2]。是指用限制性内切酶酶切不同个体基因组DNA后，酶切片断长度所显示的差异。这一技术用放射性同位素（通常是32P）或非放射性物质（如生物素、地高辛）标记DNA片段作为同源序列探针（即RFLP标记），与经限制性内切酶消化并转移到支持膜上的基因组DNA杂交，通过放射性自显影（或非同位素技术）来显示酶切片断的大小，检测不同遗传位点的等位变异。其主要特点是遍布于整个基因组，数量几乎是无限的；无表型效应，不受发育阶段及器官特异性限制；共显性，可区分纯合子和杂合子；结果稳定、可靠； DNA需要量大，检测技术繁杂。

1.2 RAPD标记

RAPD是由Williams和Welsh等（1990）[3]发展起来的分子标记技术。这一技术以基因组DNA为模板，采用一套随机核苷酸序列（通常为10bp）为引物，通过PCR扩增，产生不连续的DNA产物，用于检测DNA序列的多态性。其主要特点是技术简便；DNA样品需要量少；设计引物无须知道序列信息，引物价格便宜，实验成本低，但实验重复性较差，结果可靠性较低；显性遗传，不能鉴别杂合子和纯合子。

1.3 AFLP标记

AFLP是由荷兰KeyGene公司Zabeau和Vos等[4]发展起来的分子标记技术。其基本原理是选择性扩增基因组DNA的限制性内切片段，其具体方法是用限制性内切酶酶切基因组DNA，将特定的接头（adapter）与酶切的DNA片段连接，形成带接头的特异片段，通过接头序列和PCR引物的识别，特异性片段得到扩增，最后通过PAGE观察酶切片段的多态性。它结合了RFLP和RAPD技术的优点，既具有RFLP的可靠性，又具有RAPD的灵敏性，其最大优点是多态性丰富，重复性好，通过变性PAGE可检测到的谱带多达50-100条，是一种十分理想和有效的遗传标记。缺点是成本高，通常需要同位素检测（也可以经硝酸银染色观察多态性）。

1.4 SRAP 标记

相关序列扩增多态性( sequence2related amplified polymorphism， SRAP) 是由美国加州

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