Envision法与LSAB法在免疫组化染色中的对比观察

　第30卷第4期　　　　　　　　　　　　广州医学院学报　　　　　　　　　　　Vol.30No.4　　2002年12月　　　　ACADEMICJOURNALOFGUANGZHOUMEDICALCOLLEGE　　　　　Dec.2002

实验技术

Envision法与LSAB法在免疫组化染色中的对比观察

李　雯　梁颜笑　刘国荣

(广州医学院附属市一医院病理科,广州510180)

　　摘要　目的:对目前免疫组织化学染色中应用最为广泛的Envision二步法与LSAB三步法进行比较。方法:将

本科常规肿瘤活检标本固定,脱水,石蜡包埋,切片,分别应用CK、Envision法和LSAB法进行相应的30多种不同单克隆/多克隆抗体免疫组化染色。结果:两种方法特异性强,阳性定位准确,无差异。Envision法敏感度及阳性强度均优于LSAB法,操作更为简便,更省时,背景清晰,非特异性染色少,缺点是试剂盒在价格上略高于LSAB法。结论:Envision二步法特别适合于快速临床病理诊断,而LSAB法应用于科研或定量试验比Envision法效果更理想。

关键词　Envision;LSAB;免疫组化方法;对比中图分类号　R392-33　文献标识码:A　文章编号:1008-1836(2002)04-0050-03

　　随着免疫组织化学技术在病理诊断和科研工作中的普及,其检测方法也在不断改进和提高,向着更

敏感、更特异方向发展中最常用的Envision二步法和L较,E法染色步骤和时间

dyeingstepandtimeofEnvisionπs

methodandLSABπsmethod

Dyeingstep

)Firstantibody(37℃

)Secondantibody(37℃)Thirdantibody(37℃

Envisionπs(time)LSABπS(time)20～30min10～30min

30～60min20～30min20～30min

1　材料和方法

1.1　标本

取自本科常规肿瘤活检标本,包括多种上皮源

性肿瘤、间叶源性肿瘤、神经源性肿瘤和淋巴瘤等。组织经10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,60℃烘烤30min。1.2　试剂

所用的抗体有CK、CK7、CK19、CK20、CEA、EMA、CA125、Vim、HHF235、SMA、C2Kit、Desmin、S2100、CD31、CD34、CD68、HMB245、ER、PR、Cerb2B22、VEGF、PCNA、P53、GFAP、NSE、

CgA、Syn、

2　结果

两种方法特异性强,阳性定位准确,分别为细胞浆、细胞核、细胞膜和间质,呈棕色的阳性反应,经苏木素复染后,棕色与蓝色对比鲜明,大多数组织片均无显著的背景染色,为免疫组化染色中较为理想的两种选择方法。Envision法敏感度与阳性强度均比LSAB法高,并使一抗的稀释度提高了1～2倍,背

景更加清晰,非特异性染色少,而且简化了操作步骤,只需两步就可完成,缩短了染色时间,比LSAB法节省时间40～60min,缺点是试剂盒价格上略高于LSAB法试剂盒。

α、LCA、UCHL1、CD3、CD20、CD79HPV等30多种单克隆和多克隆抗体。Envision法和LSAB法试剂盒均为DaKo公司产品。1.3　方法上述抗体同时用Envision法和LSAB法进行免疫组化染色。首先将切片常规脱蜡至水,微波抗原修复或胰蛋白酶消化处理,0.05mol/LPBS清洗3次,每次3min,根据组织的需要,滴加不同的一抗,

作者简介:李雯,女(1968.11-),主管技师。研究方向:免疫组织化学。

3　讨论

免疫组织化学技术是利用已知的特异性抗体与抗原的特异性结合来鉴定组织或细胞内某种物质的性质,并利用酶作用于底物所产生的颜色反应来显示的一种技术。它经历了三步法的PAP法、ABC法、LSAB法发展到二步法、一步法,目前应用最广,染色结果最为理想是LSAB法和Envision法。Envision法是利用葡聚糖多聚体复合物技术,将一

50

第1页下一页