免疫组化技术总结.doc

wh2008版主——免疫组化经历介绍

我是2006.08进入丁香园论坛，当时主要是查找文献来的（从低分区-高分区-骨干战友求助区，我查到了很多自己急需的文献）。后来经过一段时间的浏览和学习，发现丁香园论坛还是一个以实验技术交流为主的地方，正好在本课题组建立免疫组化试验方法，于是在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享。

2008年12月，我在形态版的一个汇总贴——【原创】我的免疫组化历程（已上了首页flash和加入为数不多的丁香通实验技术精彩专题），让我的免疫组化经历得到了进一步的升华。在论坛内我目前共得到13个精华帖，其中有7个是关于免疫组化方面的(有免疫组化全园资料整理、经验和教训总结、亲身案例讲述、难题集锦等等，多是原创经验和心得体会)。

今年，我给研究生上“免疫组化试验课”，从实验中发现许多研究生的确是免疫组化“新手”，他们只注重如何做和最终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。这在平时带研究生做组化试验也发现他们一旦按照我之前摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。

当然，免疫组化对于我来说还不能说什么都知道，其实肯定有不懂的问题，只不过我做的多了、失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。此外，个人经验不可能面面俱到，还需要更多有经验的战友加入分享、纠正和补充。让我们一起来打造丁美好的香园论坛——免疫组化精彩专题更新啦！！！

个人免疫组化感悟（最新原创）

1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。

2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。

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