石蜡切片免疫组化步骤
1. 石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟。
2. 脱蜡和水化:二甲苯(20min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(5min)→80%乙醇(5min)
3. PBS洗2次各5min,蒸馏水冲洗1次5min,
4. 抗原修复:压力锅开始喷气时,盖上气阀约1.5~2.5min,冷却,取下气阀,冷却至室温
5. 蒸馏水洗1次5min,PBS洗2次各5min
6. 加3%H2O2孵育30min(室温)
7. PBS洗3次各5min
8. 加兰色试剂,室温孵育30min,倾去,勿洗
9. 滴加一抗,37℃孵育2~3h,或4℃过夜
10. PBS冲洗3次各5min
11. 滴加黄色试剂(B),37℃孵育30min
12. PBS洗3次各5min
13. 滴加试剂C(橙色),37℃孵育30min
14. PBS洗3次各5min
15. DAB显色5~20min,自来水充分冲洗
16. 苏木素复染2~3min,自来水充分冲洗
17. 盐酸酒精分化2s,自来水充分冲洗
18. 脱水、透明80%(5min)→95%(5min)→95%(5min)→100%(5min)→100%(5min)→二甲苯(10min)→二甲苯(10min)
19. 封片:中性树脂,加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡),自然晾干
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