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石蜡切片免疫组化步骤

石蜡切片免疫组化步骤

1. 石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟。

2. 脱蜡和水化:二甲苯(20min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(5min)→80%乙醇(5min)

3. PBS洗2次各5min,蒸馏水冲洗1次5min,

4. 抗原修复:压力锅开始喷气时,盖上气阀约1.5~2.5min,冷却,取下气阀,冷却至室温

5. 蒸馏水洗1次5min,PBS洗2次各5min

6. 加3%H2O2孵育30min(室温)

7. PBS洗3次各5min

8. 加兰色试剂,室温孵育30min,倾去,勿洗

9. 滴加一抗,37℃孵育2~3h,或4℃过夜

10. PBS冲洗3次各5min

11. 滴加黄色试剂(B),37℃孵育30min

12. PBS洗3次各5min

13. 滴加试剂C(橙色),37℃孵育30min

14. PBS洗3次各5min

15. DAB显色5~20min,自来水充分冲洗

16. 苏木素复染2~3min,自来水充分冲洗

17. 盐酸酒精分化2s,自来水充分冲洗

18. 脱水、透明80%(5min)→95%(5min)→95%(5min)→100%(5min)→100%(5min)→二甲苯(10min)→二甲苯(10min)

19. 封片:中性树脂,加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡),自然晾干

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