简便人大肠癌原代细胞培养方法的探讨

临床军医杂志2011年8月第39卷第4期ClinJMedOffic，Vol.39，No.4，August，2011·611·简便人大肠癌原代细胞培养方法的探讨

蔡慧云，于波，白雪，杜茜，杜峻峰（解放军北京军区总医院普通外科，北京100700）

摘要：目的探讨简便、实用的人大肠癌原代细胞培养方法。方法在培养瓶底放置经过高浓度抗生素和两性霉素B反复处理的约1mm3大小的人大肠癌组织块数个，加入2ml含高浓度抗生素和两性霉素B的RPMI1640培养液，直立培养7～10h，轻轻放平培养24h后再加入2ml高浓度抗生素和两性霉素B的RPMI1640培养液，至大量肿瘤细胞培养出来。结果

出，贴壁大量生长，细胞融合成片，蔓延至整个瓶底。结论

瘤细胞。

关键词：人大肠癌组织；原代细胞培养

中图分类号：R735.34文献标志码：Adoi：10．3969/j．issn．1671-3826．2011．04．033826（2011）04-0611-02文章编号：1671-肿瘤细胞在3～4d后从组织块内爬利用简便易行的方法对大肠癌新鲜标本进行原代细胞培养可以得到存活的肿

AnalysisonmethodofprimarycellcultureofhumancolorectalcancerinvitroCaiHui-yun，YuBo，BaiXue，DuQian，DuJun-feng

PLA，Beijing100700，China）

Abstract：Objective

MethodsToinvestigateaconvenientandpracticalwayofprimarycellcultureofhumancolorectalcancerinvitro．（DepartmentofGeneralSurgery，GeneralHospitalofBeijingCommand，Cutthehumancolorectalcancertissuesintosmallpieces（about1．0mmdiameter）afterthetreatmentofhighconcentra-tionsofpenicillinphytomycinandamphotericinB，transferthemtothebottomofthecultureflask，thenadd2mlcellculturemedium（RPMI1640combinedwithhighconcentrationsofpenicillinphytomycinandamphotericinB），uprightculturingfor7－10handhorizontalculturingfor24h，addadditional2mlRPMI1640combinedwithhighconcentrationsofpenicillinphytomycinandampho-tericinBuntilthecellsmature．Severaldayslatterexplantswillattachtothebottomandcellswillgrowoutfromthesitesofadherence．Results3or4dayslaterplentyoftumorcellswillgrowoutfromthesitesofadherence，andgrowupintopieces，spreadwholeof

Itcangainsurvivalcancercellthroughsimple，convenientandpracticalmethodsfromprimarythebottomofflask．Conclusion

cellcultureofhumancolorectalcancerinvitro．

Keywords：humancolorectalcancertissue；primarycellculture

原代培养也叫初代培养，是从供体取得组织细胞后在

体外进行的首次培养。原代细胞因刚从组织中分离开，生

物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，基因

保留量在90%以上，也最接近和反映体内生长特性，适宜

用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。但原代肿瘤

细胞的培养比较繁琐、易污染，培养成功率也较低。本实

验室在长期的实践中摸索了一种简便、实用的人大肠癌原

代细胞培养的方法。

1．1材料与方法材料、标本与器械（1）细胞培养液的配制：见表1。细胞培养液RPMI1640培养液胎牛血清青霉素160万单位/支

链霉素100万单位/支

两性霉素B25mg/支表1细胞培养液的配制100ml80ml30ml20%500U/ml500U/ml12．5mg/L最终浓度（2）标本：本院手术室内切取大肠癌新鲜组织30例，均经病理诊断证实，其中高分化腺癌8例，中分化腺癌9例，低分化腺癌13例。（3）器械：剪刀、镊子、青霉素小瓶，培养瓶、无菌盘、无菌吸管等。基金项目：国家自然科学青年基金（81000189）

作者简介：蔡慧云（1977－），女，河北人，主管技师，北京军区总医

院全军普通外科中心实验室技师长，目前主要从事消化道肿瘤的

基础研究1．21．2．1方法实验前准备（1）取材瓶准备：在2个青霉素小瓶

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