一种改良小胶质细胞的培养方法

江西医学院学报2009年第49卷第4期 ActaAcademiaeMedicinaeJiangxi2009,Vol49,No4

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一种改良小胶质细胞的培养方法

聂 菁,李耀斌,周 明,吕 诚

(南昌大学医学院解剖学教研室,南昌330006)

摘要:目的 建立一种简便高效的小胶质细胞的原代培养及纯化方法。方法 无菌环境下采取雄性新生SD大

鼠(24h内)全脑,清洗、剪碎,以0.25%胰蛋白酶消化,200目滤网过滤,混合培养。9d后,利用盐酸利多卡因注射液代替传统机械振摇纯化分离小胶质细胞;采用免疫细胞化学方法检测CD11b/c的表达情况,观察小胶质细胞形态。结果 改良方法可获得高产量和高纯度的小胶质细胞。显微镜下可见刚贴壁的小胶质细胞多为圆形,边缘不规则;培养4~5d后小胶质细胞形态多呈阿米巴样,折光不均。结论 该方法步骤简便,可有效地提高小胶质细胞的产量和纯度,具有较高的实用价值,为研究与小胶质细胞相关的疾病提供了基础。

关键词:小胶质细胞;细胞培养;鉴定;动物,实验;大鼠

中图分类号:R322.81 文献标识码:A 文章编号:1000-2294(2009)04-0001-03

AModifiedMethodforMicrogliaCulture

NIEJing,LIYao-bin,ZHOUMing,LVCheng

(DepartmentofAnatomy,MedicalCollegeofNanchangUniversity,Nanchang330006,China)ABSTRACT:Objective Tomodifythecurrentmethodandestablishanefficientmethodtoim-proveprimarycultureandpurificationofmicroglia.Methods ThewholebrainswereisolatededfromneonatalSDrats(within24h)understerilecondition,andthenrinsedandmincedintosmallfragments.Thefragmentsweredigestedby0.25%trypsinandwerefiltratedthrougha200mesh.Thecellswereinmixedculture.After9dculture,lidocainehydrochloridewasusedtosub-stitutemechanicalshakingforisolatingmicroglia.ThepurityofisolatedcellswereidentifiedbyexpressionofCD11b/cusingimmunocytochemicaltechnique.Results Highpurityofprimarym-icroglialcellswasobtainedbythismodifiedmethod.Morphologicalchangesofculturedcellswereobservedunderaninvertedphasecontrastmicroscopeandtheadherentmicrogliawereroundwithirregularmargin.Thecellswereameboidmorphouswithunevenrefractionafter4~5dculture.Conclusion Themodifiedculturemethodwasconvenientandeffectivetoincreasetheproductiverateandpurityofmicroglia,whichprovidedabasisforresearchingthemicrogliarelateddiseases.KEYWORDS:microglia;cellculture;identification;animals,laboratory;rats 小胶质细胞是一种中枢神经系统内重要的免疫感受和效应细胞,具有提高抗原、吞噬病原体、分泌细胞因子及神经修复的作用。但近年来的研究表明小胶质细胞在阿尔茨海默病等神经系统疾病的发病机制中起重要作用[1]。因此,建立一种小胶质细胞的体外纯化培养体系对于离体小胶质细胞的实验研究是不可缺少的。传统的分离纯化培养方法存在产

收稿日期:2009-01-03

基金项目:国家自然科学基金(30660073);江西省自然科学基金(0440067)

作者简介:聂菁(1982-),女,硕士研究生,助教,主要从事老年性疾病的基础研究。

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量低、周期长及步骤繁琐等缺陷。本研究对原有的培养方法进行改良,以期获得较高产量和纯度的小胶质细胞。

1 材料和方法

1.1 实验动物

雄性新生SD大鼠(出生24h以内)5只,体质

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