三种原代小胶质细胞纯化培养方法的对比及分析

目的寻找简捷、高效的原代小胶质细胞纯化培养方法。方法以小胶质细胞原代培养的经典培养方法为基础,通过提高初次接种密度、减少细胞离心过滤、进行营养丧失培养等改进,培养后期分别采用经典机械分离法、低浓度胰酶消化法和利多卡因分离纯化法行细胞分离与纯化,记录形态变化并采用同倍数视野动态计数,借助CD68及OX42抗体间接免疫荧光标记进行鉴定、计算纯度。结果三种分离方

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U东医药 20 0 8年第 4 8卷第 l 7期

三种原代小胶质细胞纯化培养方法的对比及分析 于腾波程永帅寇德伟褚言琛王爱民’。。。。 (青岛大学医学院附属医院， 1山东青岛 260; 6032第三军医大学附属大坪医院)

[摘要]目的

寻找简捷、高效的原代小胶质细胞纯化培养方法。方法以小胶质细胞原代培养的经典培养

方法为基础，通过提高初次接种密度、减少细胞离心过滤、进行营养丧失培养等改进，培养后期分别采用经典机械

分离法、低浓度胰酶消化法和利多卡因分离纯化法行细胞分离与纯化，记录形态变化并采用同倍数视野动态计数， 借助 c髓 O 4抗体间接免疫荧光标记进行鉴定、 D及 X2计算纯度。果三种分离方法均获得了较高纯度和产量的结小胶质细胞，中利多卡因分离纯化法获得细胞数及纯度明显高于其他分离方法，浓度胰酶消化法次之。结论其低

小胶质原代细胞培养过程中，利多卡因分离纯化法及低浓度胰酶消化法均可有效提高培养产量及纯度，以利多卡 因分离纯化法最佳。

[关键词]小胶质细胞； 原代培养；;纯化鉴定[中图分类号] R 3 38[文献标识码] A [文章编号] 10 - 6 (08 1- 0 - 02 6 X 20 )70 40 2 0 3

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小胶质细胞是中枢神经系统内重要的免疫感受

和效应细胞，具有抗原递呈、病原体吞噬、免疫效应、 分泌多种细胞因子和神经修复作用。建立一种高效

1 1材料新生 S F级 Wia大鼠乳鼠(岛市 . P sr t青药检所)胎牛血清( i o, Gb公司)0 2 c、.5%胰蛋白酶 (i a S m公司 )倒置相差显微镜、光显微镜 (— g,荧 O l u) y s,流式细胞仪 ( PC 2 LT型，B cma mp E ISA R ek n

原代小胶质细胞体外分离纯化培养方法，对深入研究其功能及特性十分重要。早期小胶质细胞培养方法由 M Cr y与 G l n等建立， c ah t ua i但其操作步骤繁 琐，获得细胞数量有限，含有大量异质性细胞群且体。 0 7 2月一 0 8年 2月， 20年 20本研究对小胶质细胞原代培养尤其是分离纯化步骤进行对比并改良， 现综合分析其技术要点。 1材料与方法 讯作者通 4

C u e公司)图像分析仪 ( I S 2 )兔抗大鼠 ol r t, VD A 1, C醅 D多克隆抗体(北京博奥森公司) c 3, y标记羊抗兔抗体 ( i a司)小鼠抗大鼠 C b c Sm公 g, D/单克隆抗体(隆号 O 4, D Pa i e公司) FT克 X 2 B hr n n m g,IC标记羊抗小鼠抗体 (北京中杉公司) 。 12方法 .

12 1混合培养与形态观察 ..

将出生 2 4h之内的

SF级 Wia鼠乳鼠置于冰上低温麻醉 5mi, P s r大 t n

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