多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血白细胞P-糖蛋白表达的影响

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临床检验杂志 20 0 4年第 2卷第 3期 2

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文编： 1 4(0 0 2-章号1— X 0}- 72中分号R6I 0 7 243 00 06 0 图类：41 4.

文标码B献识：

实验技术

多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血白细胞 P糖一蛋白表达的影响 冯霞，秀英 (王徐州医学院附院中心实验室，江苏徐州 21 2 20 ) 0 关键词：多聚甲醛；式细胞术；-流 p糖蛋白1人外周血白细胞

多药耐药 ( u irgrs t c, R)影响肿 m hdu- ia eMD是 esn

缓解的患者)肺癌患者 2; 0例，其中初治组 l例， l难

瘤患者化疗效果的关键因素 2。M R基因编码 1 -] D1的分子量为 1000的 P糖蛋白( - )可促使药 7 0 . Pg, P物排出细胞而导致 M R D。因此，. Pg P表达水平对肿

治组 9例(包括化疗 2疗程以上病情进展，肿块增大 >5 2%或有新病灶，或肿块稳定，缩小不足 5%或 0增大不足 2%的患者 ) 5。 12试剂 . Pg - P单抗为 P E标记的 UC, I2阴性对照 为P E标记的小鼠 IG a均购自法国 I uoeh公 g2, mm nt c

瘤化疗效果及预后判断具有重要的指导作用。目前较多采用流式细胞术测定 Pg, -所用单克隆抗体为 P针对 Pg胞膜外表位的单抗 UC、 R I .P I2 M K 6或针对 Pg胞浆内表位的单抗]B1C 1 . P S -、2 9引。我们在建立方法的过程中，以急性非淋系白血病 ( N L和 A L) 肺癌患者外周血为研究样本，用流式细胞免疫荧光 法 ( C比较多聚甲醛固定前后，-P胞膜外表位 F M) Pg

司，多聚甲醛为上海试剂二厂产品。 1 3 Pg . -P测定取外周血标本， D AN,抗凝， E T -a

常规分离单个核细胞后，实验组细胞经 2%多聚甲 醛固定 2后待测， 4h以小鼠 I 2 .E替代 UC -E g aP G I2P 作为阴性对照。对照组和实验组分别与相应荧光素标记单抗结合， P S洗涤后，流式细胞仪 ( D经 B上 B公司 F C C l u) A S abr分析 1 o i 0o

o个细胞。

结合单抗 U C I2的免疫荧光改变，以探讨固定透化作用对 F M检测人外周血白细胞 Pg C - P表达的影 响。

14数据处理 . 2结果

数据以均数±标准差 ( - ) 4表 - s

1材料与方法

示，组间差异采用 t检验分析。 2的多聚甲醛固定前后， N L和肺癌初治组% A L

11病例男性 2 . 8人，女性 2人， 1年龄 1 7 8~ 2岁。其中 A L N L患者 2, 9例包括初治组 1, 8例难治组 1例( 1均为接受两疗程以上联合化疗后完全不

与难治组患者外周血白细胞 Pg表达结果见表 1 - P。

表 1多聚甲醛固定对 F M检测 A L C N L和肺癌患者外周血白细胞 Pg糖蛋白表达的影响—I )

}与 A L N L初治组相比，< . 5△与固定前相比， 0 0。 P 00; P< . 1

3讨论

位的检测，固定后细胞 U 2但 1特异的 Pg C - P表位量

研究结果表明，在未经多聚甲醛固定的标本，肺

显著增加也提示了细胞内潜在 Pg I2 - UC结合位点 P 的存在。但这些胞内潜在 Pg— P位点的多少可能与细胞膜表面 U C特异的表位的量无关， I2因为表 1结 果表明，固定的 A L未 N L难治组 Pg达高于初治 .P表

癌患者初治组与难治组外周血白细胞 Pg - P表达量无显著差异， A L而 N L患者初治组与难治组 Pg - P表 达有显著性差异，提示此法能客观地反映 Pg . P外表位的表达。而标本固定后 A L N L和肺癌组的 Pg - P

组，固定后两组未见差异。但 在固定后的标本中，肺癌与 A L N L患者，无论难

表达检测结果阳性百分率及荧光强度均显著增高， 但初治组与难治组无显著性差异，提示固定后标本不能客观地反映 Pg— P外表位表达的量，影响了外表

治与初治组，外周血白细胞 UC I2特异的 Pg - P表位阳性率及荧光强度均无显著差异，提示化疗药物对

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