苏州科铭生物技术有限公司 过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书

苏州科铭生物技术有限公司 过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书

过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书

微量法100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CA T和POD 等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子，。

测定原理：

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮100mL、浓盐酸5mL、研钵和冰。

试剂的组成和配制：

试剂一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存；(溶解时间较长，约30min，可40℃-60℃加热，务必提前准备)

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；

H2O2提取：

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1mL；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；转移至EP管中，用试剂一定容至1mL，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称（μL）测定对照

样本250

试剂一250

试剂二25 25

试剂三50 50

4000g，25℃离心10min，弃上清，留沉淀

试剂四250 250

加入试剂四溶解沉淀后，室温静置5min，取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA＝A测定-A对照。

第1页下一页