当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 自然科学 > 生物学 > 冰冻切片步骤准备材料：
酒精棉 滤纸 枪（1ml） 24孔板 刀片 毛刷 记号笔
试剂配制：
4%多聚甲醛：称取40g多聚甲醛,加入温热(约60度左右)的蒸馏水约400ml，搅拌,加入少量的1N NaOH溶液，搅拌至完全溶解；加入0.2M的PBS500ml，冷却后过滤，蒸馏水定容至1000ml。
20%蔗糖溶液：20g蔗糖加0.1MPBS（PH7.4)至100ml（温水促溶）
OCT包埋剂（购买）
染色剂：
Tris．钙缓冲液：(O．1 mol加0．018mol氯化钙)：
Tris(Hydroxymethyl)methylamine 3．025 g；氯化钙0．499 g；去离子水加至250 ml；室温保存。
酸性前孵育液：(pH4．35)乙酸钠0．2 mol 9 ml，乙酸0．2 mol 21 ml，调pH至4．35； 碱性前孵育液：Tris．钙缓冲液30 mL以0．1 NHCI仔细调pH至10．4；
ATP酶孵育液：ATP(disodium salt)45 mg（购买）；Tris．钙缓冲液30 ml，0．1 NHCl调pH至9．5。
注意：
1. ATP酶组织化学主要使用钙激活法。该方法沿用已久，所用的试剂配制比较繁复，尤其
对pH值有严格的要求，必须精确调试试剂的pH值，并每次都要新鲜配制，以保证染色的成功。
2. 前孵育液和底物孵育液应精确调节pH值，配制完成后立即用EP管分装，置一20℃保
存。
3. ATP酶染色法。可见正常骨骼肌纤维大小均匀，形状规则，排列成马赛克状。依前孵育
液pH的不同，分为不同的纤维类型。采用碱性前孵育液(pH 10．4)时，I型肌纤维不显色。Ⅱ型肌纤维呈深染。采用酸性前孵育液(pH 4．5)时，深染的为I型，浅染为IIa型，介于中间染色为IIb型肌纤维。
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闽公网安备 35021102001881号 
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