人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定

现代妇产科进展2010年12月第19卷第12期ProgObstetGynecol，Dec.2010，Vol.19，No.12

·论著·

人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定

武加利1，纪新强1＊＊

，刘

佳1，张文卿

（1．青岛大学医学院附属医院妇科，青岛266003；2．青岛大学医学院病原生物教研室）【摘要】目的：从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离培养卵巢癌干细胞，并鉴定其生物

学性质。方法：卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基（SFM）中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、

Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球CD44和CD117的表达，

筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力；将肿瘤细胞球传代扩增，并用含血清培养基（SSM）培养促使其分化，并将细胞球和普通SKOV-3细胞分别接种于96孔板，

CCK-8法检测增殖能力及其耐药性。结果：卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的细胞球，并显示很强的自我更新和增殖能力，含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长；肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记，特别是CD44，其侵袭

能力显著高于正常SKOV-3细胞（P＜0．05）；细胞球对顺铂具有更强的耐药性，将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24，48及72h后，细胞球抑制率分别为2．59%，

8．43%，12．08%，显著低于分化贴壁细胞（抑制率分别为10．73%，28．13%，39．17%），分别比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获取的细胞球，可能含有一小部分具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞，多表达CD44和CD117抗原标记，且CD44更具有特异性。

【关键词】卵巢肿瘤；肿瘤干细胞；肿瘤球状体细胞；无血清培养基，悬浮培养

中图分类号：R737．31文献标识码：A文章编号：1004－7379（2010）12－0893－04Isolationandinitialidentificationofhumanovariancancerstemcells．WuJiali，JiXin-qiang，LiuJia，etal．DepartmentofGynecology，AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofQingdao

University，

Qingdao266003【Abstract】Objective：Toisolateandidentifyovariancancerstemcellsfromhumano-variancancercelllineSKOV-3andtoidentifytheirbiologicalproperties．Methods：SKOV-3

cellswereculturedinserumfreemedium（SFM）withEGFandbFGFtoderivetumorspheres．Flowcytometryanalysisandcellinvasionassaywereappliedtoexaminethecellsurfacemarker（CD44，CD117）expressionpatternandcellinvasiveabilityofbothtumorspheresandparental

cells；Tumorsphereswerethenexpandedandculturedinserum-containingmediumtopermittheirdifferentiation．Theproliferativecapacityanddrugresistanceoftumorsphere-formingcells

wastestedbycellcountingkit-8（CCK-8）assay．Results：Smallnumberoffloatingtumor

sphereswereisolatedandexpandedinserumfreemedium（SFM）．Thesetumorspheresatta-chedtothebottomofcultureplatesandbegantodifferentiateinserum-supplementedmedium

（SSM）；CD44andCD117antigensweresignificantlyhigherintumorspheresthanthoseinthecommonSKOV-3cells，andtheinvasiveabilitywasincreasedthanthoseofparentalcells（P＜

0．05）．Bycontrastwiththedifferentiatedcellsunderstandardserum-containingculturecondi-tions，thesesphere-formingcellsweremoreresistanttocisplatinafter24，48and72hoursof

treatment（2．3%vs9．1%，

8．6%vs22．8%and18．7%vs36．8%，P＜0．05）．Conclusion：Thesphere-formingcellsisolatedfromhumanovariancancercelllinehavethecharacterization

ofcancerstemcells，

andsignificantlyexpressCD44、CD117antigens．CD44maybeaspecificantigenmarkerforthehumanovariancancerstemcells．

【Keywords】Ovarianneoplasms；Tumorstemcells；Tumorspherpids；Serumfreemedi-um，floatingculturesystem

＊山东省自然科学基金（No：Y2008c33）

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通讯作者Email：jxqsjy@126．com

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